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说一说超微量分光光度计的核酸定量功能

更新时间:2023-05-10   点击次数:687次
  分光光度计就是利用分光光度法对物质进行定量定性分析的仪器。由于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量样本量很小,于是超微量分光光度计应运而生。
 
  今天咱们讨论的核酸定量功能是超微量分光光度计使用频率最高的功能。可以定量溶于缓冲液的寡核苷酸,单链DNA、双链DNA,以及RNA。核酸的最高吸收峰的吸收波长260nm。每种核酸的分子构成不一,因此其换算系数不同。定量不同类型的核酸,事先要选择对应消光因子。如:1OD的吸光值分别相当于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。
 
  测试后的吸光值经过上述系数的换算,从而得出相应的样品浓度。除了核酸浓度,分光光度计显示几个非常重要的比值表示样品的纯度,如A260/A280的比值,用于评估样品的纯度,因为蛋白的吸收峰是280nm。纯净的样品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白质或者酚类物质的影响。A230表示样品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,较纯净的核酸A260/A230的比值大于2.0。

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