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使用分光光度计的步骤与方法

发布时间:2017-07-13   点击次数:1136次
   分光光度计是将成分复杂的光,分解为光谱线的科学仪器。测量范围一般包括波长范围为380~780 nm的可见光区和波长范围为200~380 nm的紫外光区。不同的光源都有其特有的发射光谱,因此可采用不同的发光体作为仪器的光源。钨灯的发射光谱:钨灯光源所发出的380~780nm波长的光谱光通过三棱镜折射后,可得到由红、橙、黄、绿、蓝、靛、紫组成的连续色谱;该色谱可作为可见光分光光度计的光源。
  使用分光光度计的步骤与方法:
  1.预热仪器:
  为使测定稳定,将电源开关打开,使仪器预热20min,为了防止光电管疲劳,不要连续光照。预热仪器时和在不测定时应将比色皿暗箱盖打开,使光路切断。
  2.选定波长:
  根据实验要求,转动波长调节器,使指针指示所需要的单色光波长。
  3.固定灵敏度档:
  根据有色溶液对光的吸收情况,为使吸光度读数为0.2~0.7,选择合适的灵敏度。为此,旋动灵敏度档,使其固定于某一档,在实验过程中不再变动。一般测量固定在“1”档。
  4.调节“0”点:
  轻轻旋动调“0”电位器,使读数表头指针恰好位于透光度为“0”处(此时,比色皿暗箱盖是打开的,光路被切断,光电管不受光照)。
  5.调节T=100%:
  将盛蒸馏水(或空白溶液或纯溶剂)的比色皿放入比色皿座架中的*格内,有色溶液放在其它格内,把比色皿暗箱盖子轻轻盖上,转动光量调节器,使透光度T=100%,即,表头指针恰好指在T=100%处。
  6.测定:
  轻轻拉动比色皿座架拉杆,使有色溶液进入光路,此时表头指针所示为该有色溶液的吸光度A,读数后,打开比色皿暗箱盖。
  7.关机:
  实验完毕,切断电源,将比色皿取出洗净,并将比色皿座架及暗箱用软纸擦净。
  分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸,蛋白定量以及细菌生长浓度的定量,应用的领域也日渐广泛。
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