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光度计物理学的UV法实现

  • 更新时间2013-09-30
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   光度计是一种实用性较强且测试准确的光学分析仪器,在平时测试过程原理当中需要用到例如UV法来实现一些光度上的测量。光度计的UV法是在280nm波长,直接测试蛋白与测试核酸类似,要求A280的吸光值至少大于0.1A,*的线性范围在1.0-1.5 之间。实验中选择Warburg 公式显示样品浓度时,发现读数“漂移”。这是一个正常的现象。事实上,只要观察A280的吸光值的变化范围不超过1%,表明结果非常稳定。


   选择Warburg 公式,光度计可以直接显示出样品的浓度,或者是选择相应的换算方法,将吸光值转换为样品浓度。蛋白质测定过程非常简单,先测试空白液,然后直接测试蛋白质。由于缓冲液中存在一些杂质,一般要消除320nm 的“背景”信息,设定此功能“开”。

   漂移的原因是因为Warburg 公式吸光值换算成浓度,乘以一定的系数,只要吸光值有少许改变,浓度就会被放大,从而显得结果很不稳定。蛋白质直接定量方法,适合测试较纯净、成分相对单一的蛋白质。对于紫外线来说可以之间定量法相对于比色法来说速度会更加快,操作也较为简便,可以更加容易受到平行物质的干扰,例如DNA的干扰就是其中之一,此外敏感度也是一方面因素,要求上来说蛋白的浓度会高一些,所以光度计的UV法是一种光度计中*的一个物理学技术。




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